CRISPR基础编辑器进行诊断和补救检查

在进行测试，彻底和系统测试之前，基于CRISPR的编辑工具是否达到等级或需要补救工作尚不清楚。因此，位于韩国基础科学研究所(IBS)的科学家正在管理与标准化测试相当的CRISPR。科学家提供不同的指导RNA，而不是用#2铅笔和填充椭圆形片材呈现CRISPR工具。然后科学家们使用基因组测序来检查诸如脱靶效应之类的错误。

最近，由IBS基因工程中心主任兼教授Jin-Soo Kim领导的IBS团队研究了人类细胞中腺嘌呤碱基编辑ABE7.10的错误率。这些编辑在RNA指导指定的DNA位点完成腺嘌呤到鸟嘌呤的变化。

科学家报告说，他们确定了受ABE7.10影响的人类基因组位置，并扫描了超出目标的误差。为此，他们使用了改良版Digenome-seq，这是一种测序技术，他们已经用它来成功确定胞嘧啶碱基编辑器(CBE)，CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1等的准确性。

他们用7个指导RNA测试ABE7.10，对应于7个DNA靶标字母，并将结果与常见的CBE和Cas9核酸酶进行比较。修改后的Digenome-seq可以检测整个人类基因组中平均60个脱靶错误。有趣的是，尽管这三种蛋白质被设计成针对同一个位点，但它们识别出不同的脱靶点。

3月4日，Nature Biotechnology杂志发表了一篇题为“ CRISPR RNA指导的腺嘌呤碱基编辑的全基因组特异性靶向特异性 ”的文章。该文章描述了科学家如何在含有肌苷的部位产生双链断裂。通过在体外用腺嘌呤碱基编辑器7.10蛋白质 - 指导RNA复合物和内切核酸酶V或人烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和核酸内切酶VIII的组合处理人基因组DNA来进行腺嘌呤脱氨基因。

该文章的作者写道：“Digenome-seq检测腺嘌呤碱基编辑的脱靶位点，取代频率为0.1%或更高。” “我们显示腺嘌呤碱基编辑器7.10，胞嘧啶碱基编辑器BE3和未修饰的CRISPR相关蛋白9(Cas9)通常识别不同的脱靶位点，突出了对其全基因组特异性进行独立评估的必要性。”

IBS团队还展示了一些策略来抑制脱靶修改的数量。在指南RNA末尾添加几个Gs减少了脱靶错误，以及使用不同类型的Cas9(由2018年由同一团队开发的Sniper-Cas9)和ABE7.10的交付。通过预装配的核糖核蛋白，而不是通过质粒。

展望未来，该团队旨在为ABE的发展做出贡献，以更加精确和有效的方式引入所需的单字母更改。“随着基础编辑器的准确性得到证实，我们预计它将在未来的医疗和农业领域得到广泛应用，”Kim说。

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