第１９卷第４期　吉林农业科技学院学报　Ｖｏ１．１９，Ｎｏ．４　

２０１０年１２月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１０　

微粉化技术对金银花叶抑菌效果的研究　

李玉杰　，崔贞爱２，王立国２，李玉杰３　

（１．吉林农业科技学院动物科学学院，吉林１３２１０１；２．吉林省永吉县岔路河镇畜牧兽医工作站，永吉１３２２１４；　

３．吉林市龙潭区承德街道畜牧兽医站，吉林１３２０２２）　

摘要：采用温水法对不同粒度中药材金银花叶进行提取，利用圆形纸片法对７种常见茵进行抗茵试验。结果显示　

随着粉碎粒度的变细，金银花叶的抑茵效果明显提高，即超微粉（１　ｎ）＞１６０目筛细粉＞１２０目筛细粉＞８０目筛细粉＞６０　

目筛细粉。得出微粉化技术对金银花叶抑茵效果影响明显。　

关键词：微粉化技术；金银花叶；抑茵效果　

中图分类号：￥５６７　文献标识码：Ａ　

Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｔｏ　Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　Ｌｅａｆ　ｂｙ　Ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　

Ｌｌ　ＹｕｊｉｅＩ．ＣＵＩ　Ｚｈｅｎａｉ　，ＷＡＮＧ　ＬｉＧｕｏ￣，Ｌｌ　ＹｕＪｉｅ３　

（１．廊　Ｓｆ，ｍ￣ａｎｄ　Ｔｅｄｍｄ，ｏ￣　，砌１３２１０１；２．　Ａｎ／ｒｒ￣　ａｎｄ　Ｖａｅｒ／ｍｒｙ　ｔ＇ｎ砌Ｐｒｏ／ｎｅｅ　Ｙｏ，￣／　

ＧＴ．ｍｔｙ　ｃ　Ｔｍｒｔ，　１３２２１４；３．五　铆上０，　Ａｎｋｎｄ陆蜘ａｎｄ　Ｖａｅｒ／ｎａｒｙ　ｏｆ　哪　腑　泌，１３２ｍ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　

ｌｅａｆ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｄｏｐｔｉｎｇ　Ｗａｌｌｌｌ　ｗａｔｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｏ　ｕｔｉｌｉｚｅ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｔｅｓｔ　ｔｏ　ｓｅｖｅｒｌ　ｃｏｒｒｌｍｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｒｏｕｎｄｅｄ　

ｐｆｌｐｅｒ　ｄｉｓｋ　ｍｅｔｈｏｄ．７ｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　１１１０１￣ｆｉｎｅ　ｓｒｍ￣ｇ　ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ，ｍ０ｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅ－　

ｒｉｏｓｔａｓｉｓ　Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　ｌｅａｆ，ｎａｍｅｌｙ　ｓｕｂｍｉｅｍｎ　ｐｏｗｄｅｒ（１０ｐ．ｍ）＞１６０　ｍｅｓｈ　ｓｉｅｖｅ　ｏｐｗｄｅｒ＞１２０　ｍｅｓｈ　ｓｉｅｖｅ　ｐｏｗｄｅｒ＞　

８０　ｍｅｓｈ　ｓｉｅｖｅ　ｏｐｗｄｅｒ＞６０　ｍｅｓｈ　ｓｉｅｖｅ　ｏｐｗｄｅｒ．Ｏｂｖｉｏｕｓ　ｅｆｆｃｅｔｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｇｅｎｅｒａｔｄｅ　ｔｏ　ｈｔｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ｈｔｅ　ｈｏｎ－　

ｅｙｓｕｅｋｌｅ　ｌｅａｆ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｍｎｉｚａｔｉｏｎ　ｔｃｅｈｎｏｌｏｇｙ；ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　ｌｅａｆ；ｔｈｅ　ｅｆｆｃｅｔｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ．　

金银花为忍冬科植物忍冬、红腺忍冬、山银花　用。　

或毛花柱忍冬的干燥花蕾或带初开的花。其主要　１．２供试菌种　

活性成分是绿原酸金，具有抗菌和增强机体免疫　金黄葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、　

功能的作用…。研究证明金银花越冬老叶中绿原　

枯草杆菌、青霉、黄曲霉、黑曲霉均由吉林农业科　

酸的含量为金银花的１．４１倍【２。目前，国内报道　２＿技学院微生物学教研室保存菌种。　

金银花叶用乙醇提取、水提取等方法提取后，进行　

１．３试剂　

抑菌试验　Ｊ，但至今未见采用不同粒度的金银花　

琼脂粉和蛋白胨（购自上海汇合生物科技有　

叶提取物抑菌试验的报道。本研究用温水法对金　

限公司），牛肉膏（购自上海翔升生物科技有限公　

银花叶不同粒度进行了提取，并通过抑菌实验来　

司），化学试剂等均为分析纯。　

观察金银花叶提取物对不同菌种的影响。　

１．４仪器　

１实验材料　

万能粉碎机（ＷＦ）；电热恒温干燥箱（２０２一　

１．１金银花叶　

ｌＡＢ）；高压灭菌－￣（ＹＸＱ—ＬＳ—ｓｏｓ￣）；行星式球磨　

２００９年ｌ０月采于山东诸城，越冬干燥后备　

机（ＱＭ一１ＳＰ２出料粒度最小可至０．１ｐｍ）；电子天　

收稿日期：２０１０—１０—１８　

基金项目：吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目（吉教科合字［２ｏｏ，）３第４９５－８－）　

皇者简介：李玉杰（１９６６一），女，吉林省辉南县人，副教授，从事预防兽医学和动物制药的教学和研究。　

・９・　

第１９卷第４期　吉林农业科技学院学报　Ｖｏ１

．１９．Ｎｏ．４　

２０１０年１２月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｄｅｃ锄ｂｅｒ．２０１０　

平（ＡＵＷ２２０Ｄ）；透射电镜（ＨＩＴＡＣＨＩ　ＴＥＭ　Ｈ一　

准确称取上述制得的五种粉末各５　ｇ，在水浴锅　

８１００ＩＶ加速电压２００ＫＶ）等。　

（８０℃）中热浸５０ｍｉｎ，然后定容至５０ｍＬ，于容量瓶　

２实验方法　中过滤，所得滤液即为金银花叶提取液。　

２．１培养基的制备　２．４抑菌实验　

细菌（ＬＢ）用营养琼脂［　］：蛋白胨１０　ｇ，牛肉膏　２．４．１抑菌直径的测定采用滤纸片法。取直　

３　ｇ，ＮａＣ１　５　ｇ，琼脂１５　ｇ，葡萄糖５　ｇ，水１　０００　ＩＴｌＬ，用　

径６ｍｍ的滤纸片，分别放入五种提取液中浸泡　

ｈｎｏｌ・Ｌ－１的氢氧化钠溶液调节ｐＨ：７　７．５。　

４ｈ。取出置于真空干燥箱中灭菌干燥。取各种供　

霉菌培养用察氏培养基：ＮａＮ％２　ｇ，Ｋ２Ｉ－ＩＰＯ４　１　

试菌悬液各０．２ｍＬ，分别注入无菌培养皿内，再倒　

ｇ，ＫＣ１　０．５　ｇ，ＭｇＳ０４・７Ｈ２０　０．５　ｇ，ＦｅＳＯ４０．Ｏｌ　ｇ，蔗糖　

人１５ｍＬ琼脂培养基，混匀后冷却成含菌平板。然　

３０ｇ，琼脂１５ｇ，水１　０００　ｍＬ，ｐＨ值自然。　

后用无菌镊子取浸泡过的滤纸片，轻轻贴放含菌　

以上培养基均在１．０５ｋｇ／ｃｍ２（１２１．３℃）灭菌　

平板上，每皿贴２片试验样片，１片无菌生理盐水　

３０ｒａｉｎ。　对照片。置培养箱中３７＇１２培养２４ｈ，霉菌２８℃培　

营养肉汤培养基：取蛋白胨、牛肉浸出粉、氯　

养４８ｈ。测定抑菌圈直径，实验重复做３次。　

化钠、蒸馏水，按《中国药典》规定比例混合，微温　

２．４．２　ＭＩＣ及ＭＢＣ的测定采用微量肉汤稀释　

溶解后，调节ｐＨ为弱碱性，煮沸，滤清，调节ｐＨ　

法。ＭＩＣ（Ｍｉｎｉｍａｌ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）为最小抑　

值，使灭菌后为７．２士０．２，在１１５￣Ｃ灭菌３０　ｍｉｎ。　

菌浓度，即药物（一组是１６０目、１２０目、８０目、６０　

２．２菌悬液的制备　

目金银花叶细粉水提取物等量混合，为细粉组；另　

将供试菌种在适宜的琼脂平板上划线，于　一组为金银花叶超细微粉水提取物）与一定浓度　

３７℃培养箱内培养４８　ｈ，用白金环挑起典型菌落　

的菌液作用后，能够抑制可见菌生长的最低浓度；　

接种营养肉汤管中，在３７￣Ｃ下培养２４　ｈ，以无菌生　

ＭＢＣ（Ｍｉｎｉｍａｌ　Ｂａｃｔｅｒｃｉｄａｌ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）为最小杀菌　

理盐水制成含菌数约为１０７　ｅｆｕ・ｍＬ～，供实验备　

浓度，即在ＭＩＣ基础上，从每管吸取ｌＯ／ｚＬ溶液，点　

用。　

于固体培养基上，继续按ＭＩＣ培养条件培养，以杀　

２．３金银花叶中抗菌物质的提取　

死９９．９％细菌数量的最低浓度为最小杀菌浓度。　

２．３．１金银花叶细粉及超细微粉的制备将干　

采用二被稀释法将药液用无菌生理盐水稀释系列　

燥金银花叶用粉碎机粉碎，所得金银花叶粉先后　

浓度（５．０００％～１００％ｖ／ｖ），在９６孔板上每孔加　

用１６０目．１２０目、８０目、６ｏ目筛细粉留适量备用；　

ｌＯ０￣ｇ不同浓度的药液和１００／￣Ｌ菌液，使最终菌液　

其余部分再用球磨机进行球磨ｌＯｈ后放入电镜观　

浓度为１　５×１７０ｃｆｕ・ｍＬ～，以无菌生理盐水加菌　

察（金银花叶超细微粉粒子的大小约为几百纳　

液作为阳性对照，每个实验重复３次。　

米）。　

３实验结果　

２．３．２金银花叶中水溶性抑茵物的提取分别　

３．１抑茵直径的结果见表１。　

表１金银花叶对７种菌株的抑菌直径　

由表１可以看出，金银花叶水提取物对金黄　

曲霉和青霉也有一定的抑制作用；对青霉的抑制　

葡萄球菌（典型的革兰氏阳性细菌）和大肠杆菌　

作用较弱。金银花叶不同粒度的水提取物对于各　

（革兰氏阴性细菌）的抑制作用较强；对黑曲霉、黄　

（下转第４７页）　

・　１０・　

第１９卷第４期　吉林农业科技学院学报　Ｖｏｌ・１９，Ｎｏ・４　

２０１０年１２月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ｍｉｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１０　

修编中，一定要按照耕地保有量等指标要求，认真　

保护区内的农户发放《基本农田保护责任奖惩　

确定基本农田保护区地块范围，在规划期内除不　

卡》，对依法保护基本农田的农户按其所保护的面　

可抗拒因素和国家重大决策外，一律不得调整基　

积发放奖金，对没有履行义务的农户进行教育，提　

本农田规划，坚决维护土地利用总体规划的严肃　

高其保护意识，把基本农田保护的责任落实到户。　

性。第三，健全土地利用总体规划的监督体系。　

在把土地利用总体规划地块落实到户的前提下，　参考文献：　

蒋亚平．中国土地［Ｍ］．中国国土资源报社出版，２００７：８．　

一是要以行政村为单位制作土地利用在提取规划　

［］］

图公示牌，接受社会的广泛监督；二是建议国家要　

［２］蒋亚平．国土资源通讯［Ｍ］．中国国土资源报社出版，２００７；　

２０．　

在提取的土地出让金等收益中拿出一定的比例建　

［３］刘黎明．土地资源学［Ｍ］．中国农业大学出版社，２００１（１０）：　

立“基本农田保护基金”，在乡（镇）土地利用总体　２６１．　

规划经批准后，由乡（镇）政府应及时向基本农田　

责任编辑：吴艳玲　

、

给　蹄蛉　写　：　岍鼯　写岈　写　岍鬯　宕　耷　、　、　君　分嗡　；　

（上接第１０页）　

种菌类的抑制作用不同（抑菌环越大，抑菌效果越　３．２　ＭＩＣ及ＭＢＣ的结果见表２。　

好），超细微粉的抑菌效果最好。　

表２金银花叶的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度　

提取物浓度　超细微粉水提取物　７Ｋ　坚塑　

最小抑菌浓度ＭＩＣ　最小杀菌浓度ＭＢＣ　最小抑菌浓度ＭＩＣ　最小杀菌浓度ＭＢＣ　

菌株　

（％ｖ／ｖ）　（％ｖ／ｖ）　（％ｖ／ｖ）　

（％ｖ／ｖ）　

金黄葡萄球菌　５　１Ｏ　１Ｏ　２０　

大肠杆菌　１Ｏ　１０　２ｏ　２Ｏ　

表皮葡萄球菌　ｌＯ　８ｏ　２０　８０　

枯草杆菌　１０　２０　２０　

４０　

青霉　４０　＞ｌ００　４０　＞１００　

黄曲霉　２０　８Ｏ　４０　８Ｏ　

黑曲霉　２０　

８０　

２０　

１ｏ０　

由表２可知，金银花叶水提取物对金黄葡萄　上有利于药物有效成分的溶出，增加药材有效成　

球菌的抗菌活性非常好，两组的ＭＩＣ分别为５％ｖ／　

分的提取率。但每味中药微粉化后是否都能达到　

ｖ和１０％ｖ／ｖ，ＭＢＣ分别为１０％和２０％；但对青霉　

上述效果，有待进一步研究。目前，国内报道金银　

的杀菌作用较弱，１００％时两组均没有彻底杀灭细　

花叶中绿原酸用乙醇法、水提法等方法提取，本实　

菌；对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、枯草杆菌也具有　

验只采用温水法对金银花叶不同粒度提取物的抑　

较强的抗菌活性，ＭＩＣ为１０％ｖ／ｖ或２０％ｖ／ｖ，但　

菌效果，其它溶剂提取物的抑菌效果将继续研究。　

ＭＢＣ值有所不同。通过最小抑菌浓度和最小杀菌　

浓度的测定结果，超细微粉水提取物的抗菌效果　参考文献：　

好于细粉。为金银花叶水提取物用于体内实验浓　［１］王伟．金银花的化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．中华临　

度的选择以及治疗细菌感染性疾病提供了理论依　

床医药，２００３，４（Ｊ２）：５０～５１．　’　

据。　

［２］武雪芬．金银花越冬老叶有效成分测定［Ｊ］．中药材，１９９７（１）：　

６～７．　

４小结与讨论　

［３］张宁．金银花叶的抑菌活性和抗氧化性研究［Ｒ］．香料香精　

微粉化技术对金银花叶抑菌效果影响明显。　化妆品，２００８，６（３）：９　１２．　

微粉化技术是近年兴起的应用于中药领域的一项　［４］屈景年．金银花中绿原酸一步提取法及绿原酸抗菌活性［Ｊ］．　

新技术，中药材经过超微粉碎后，粒度均匀细密，　

化学世界。２００５（３）：１６７　１６９．　

并可使细胞壁破碎，增加了药材的比表面积，理论　

责任编辑：建德锋　

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