中国实验诊断学2019年3月第23卷第3期381

文章编号：1007-4287(2019)03-0381-04

肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚

及NK细胞比例检测的临床意义

赵美淇，梁新强，刘海洲，宋庆峰，张梦雅，毛莉莎

，蒋士偲，杜江标•曹雪

，崔英**

(广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，广西南宁530022)

摘要：目的探讨肿瘤患者外周血淋巴细胞亚和NK细胞表达水平检测的临床意义

。方法选取621例肿瘤

患者(包括肺癌、肝癌、腺癌、

胃癌和鼻咽癌)为肿瘤组，同期115名健康人为健康组•采用流式细胞术检测外周血中

T淋巴细胞亚,CD19+

B细胞和NK细胞的细胞免疫表达水平并进行对比分析。

结果肿瘤组外周血的CD3、

CD4—、CD19”细胞比例及CD4-/CD8+

比值均低于健康组，

NK细胞比例高于健康组

，差异均有统计学意义(

PV

0.05)

。亚组分析结果显示•不同肿瘤间的CD8*细胞比例差异无统计学意义(P>0.05),CD3+

、CD4、CD1

『

、NK

细胞比例及

CD4「/CD旷比值差异均有统计学意义(PV0.

05)。结论肿瘤患者外周血中不同淋巴细胞亚及NK

细胞的变化对早期发现和早期诊断具有指导意义，同时也可作为临床监测肿瘤患者细胞免疫功能状态的指标之一。

关键词：肿瘤；

外周血T淋巴细胞；流式细胞术；免疫指标

中图分类号:R730.43文献标识码

：A

Clinical

significanceofperipheral

blood1'lymphocytesubsetsandNKlevelsin

tumor

patientsZHAOMei-qi,LIANG

-zhou^etal.{atedTumorHospitalofGuan^xiMed­

icalUniversity,)

Abstract:ObjectiveToinvestigatethechangeofperipherallymphocytesubsetsandNKcellsintumorpatientsand

s621patients

withtumor(includinglung

cancers,livercancers,breastcancers,stomach

cancersandnasopharyngeal

cancers)were

selected

asthetumorgroup

and115healthypeopleasthehealthycontrolsin

wcytometry

wasadoptedtodetecttheexpressionlevelsofperipheralbloodTlymphocytesub-

populati,CD19+sTheproportionofCD3,CD4,CD19cellsandtheratioofCD4/

CD8^in

peripheralblood

oftheTumorgroupwerelowerthan

those

inthehealthycontrols(P

Theproportion

ofNKcellswashigherthanthehealthycontrols(P

nalysiowedthat,therewasno

portiof

CD3+,19+,NKcellsand

theratioofCD4'/CD8weredifferent^PV0.05).ConclusionThechangesof

differentlymphocytesubsetsandNKcellsinperipheralbloodofpatientswithtumorshaveguidingsignificanceforthe

earlydiagnosis,andcanalsobeusedasoneoftheindicatorsfortheclinicalmonitoringofcellularimmunefunctionin

tumorpatients.

Keywords:Tumor；peripheralbloodTlymphocyte

subsets；Flowcytometry；immuneindexes

(ChinJLab

Diagw,2019,23：0381)

研究表明.肿瘤的发生与机体免疫功能有着密

胞技术对肿瘤患者和健康人外周血T细胞亚和

切的联系。的免疫细胞有很多种，

其中外周血NK细胞活性进行研究，以了解机体的免疫状态，分

T淋巴细胞及自然杀伤细胞起重要作用，T淋巴细析其在健康人与肿瘤患者中的区别•为临床诊治提

胞在肿瘤的发生、发展和抗肿瘤环节中.起到识别、

供相应依据。

标记和清除肿瘤细胞的作用"，而自然杀伤细胞1资料与方法

不仅与抗肿瘤、免疫调节有关,还有可能参与自身免1.1临床资料

疫性疾病的发生。通过对淋巴细胞亚的检测，可

选取2013年10月一2018年1月广西医科大

以反映机体的免疫功能状态穴。本研究采用流式细

学附属肿瘤医院收治的621例肿瘤患者作为肿瘤

组,其中男406例，女215例，年龄16-88岁.平均年

基金项目：

国家科技重大专项课题资助项目(2013ZX10002009)

龄(54.58+12.25)岁；其中，肝癌183例，肺癌114

*通讯作者,ycuiyx@例.胃癌168例，腺癌67例，鼻咽癌89例。所有

382

患者均经影像学、病理检查明确诊断。选取同期到

本院体检的健康人115名为健康组.其中男76例，

女39例，年龄25-69岁，平均年龄（

53.97+13.08）

岁。两组患者性别构成比、年龄等方面比较差异无

ChinJLabDiagn・

23・No.3

侧向散射光双参数点图，设“门”于白细胞共同抗原

（CD45）阳性细胞，计数5000个淋巴细胞，双参数分

析淋巴细胞表面标记，计算出CD3+、CD4+、CD8+、

NK和CD19+细胞的百分比含量。

1.4统计学方法

统计学意义（P〉0.05）,可以进行比较。

1.2仪器与试剂采用SPSS22.0软件对研究数据进行统计分

采用美国Beckmancoulter公司生产的仪器与

试剂，ABC溶血素.型号为EpicsXL的流式细胞

析•计量资料以（乂士s）表示.计数资料比较则采用

才检验，取检验水准a=0.05,比较健康组与肿瘤组

的组间均数时用两独立样本/检验法；比较肿瘤组

仪，型号为COULTERQ-PKEP的自动溶血仪，鼠

抗人单克隆抗体CD45/CD4/CD8/CD3和鼠抗人单

克隆抗体CD45/CD（16+56）/CD19/CD3。

1.3检测方法

的组内均数时采用单因素方差分析法，以PV0.05

为差异有统计学意义。

2结果

2.1外周血淋巴细胞亚在肿瘤组与健康组间的

区别

肿瘤组外周血CD3+、CD4+、CD19+细胞比例、

被检者分别于清晨空腹抽取5ml肘静脉血.将

抽取的静脉血置于含有乙二胺四乙酸二钠（EDTA-

Na2）的试管中。从试管中吸取100R全血，与20

R荧光素标记的鼠抗人单克隆抗体CD45/CD4/

CD4+/CD8"比值均低于健康组，NK细胞比例高于

健康组（PV0.05）.差异有统计学意义。健康组与CD8/CD3、20R荧光素标记的鼠抗人单克隆抗体

CD45/CD（

16+56）/CD19/CD3混匀，在室温下进

行30min避光反应.1h内上机检测。根据前向和

肿瘤组间的CD8「值差异无统计学意义（P>0.05）,

见表1。

表1两组淋巴细胞亚检测结果比较（％,f±s）

组别

健康组

肿瘤组

t值

nCD3+CD4+

CD8+

CD4+/CD旷

2.13±0.77

CD1旷

13.55

+4.01

NK

16.68+5.47115

621

70.27+7.46

62.

19士11.82

-9.598

38.62+7.41

34.88±10.38

—3.695

0.000

19.94士&54

21.

19士&491.92±1.0610.57+6.64

-6.492

0.000

18.07士9.24

2.204

0.028

1.457

0.146

-2.537

0.012

P值

0.

000

2.2外周血淋巴细胞水平在不同类型肿瘤患者间0.05）；腺癌患者的CD4+/CD8+比值低于其他肿

瘤患者（PV0.05）；胃癌患者的CD3+细胞比例高于

其他肿瘤患者.CD19+细胞比例低于其他肿瘤患者

的区别

对鼻咽癌患者的数据分析显示其CD3+、CD4

*

细胞比例、CD4+/CD8+比值低于其他肿瘤患者（P

（P<0.05）；不同肿瘤患者间CD8+细胞比例无差

异，见表2。

<0.05）,NK细胞比例高于其他肿瘤患者（PV

表2肿瘤组不同肿瘤类型患者淋巴细胞亚检测结果比较

（％，〒士s）

类别

肺癌

肝癌

腺癌

胃癌

鼻咽癌

F值

n

183

114

67

168

89

P值

CD3+

61.27+11.85

62.72±11.94

62.31±U.17

65.30±10.65

57.40士12.

61

7.

165

0.000

CD4+

36.26±9.89

36.03+9.81

33.76±8.28

36.71±10.01

27.95±11.45

13.582

0.000

CD8+

20.19

+9.07

20.03±7.91

22.

59±7.54

21.77士&93

22.62±7.

44

2.473

0.043

CD4+/CD8+

2.07±1.08

2.14+1.22

1.

66±0.67

1.99±1.

04

1.37±0.79

10.089

0.000

CD19+

11.11±5.97

11.85±7.

82

12.04士

&11

8.37±4.97

10.85+6.95

7.095

0.000

NK

18.26±9.72

16.91士&74

17.04士8.34

17.41±9.01

21.18±9.45

3.466

0.008

3讨论细胞亚的变化进行检测，可以快速、准确的监视机

机体抵抗肿瘤的主要方式是由T细胞介导的细

胞免疫，机体的免疫水平可以通过对肿瘤患者外周

血淋巴细胞亚检测体现⑷。因此.对外周血淋巴

体免疫状态。外周血T淋巴细胞亚包含多种细

胞.目前对CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞的作

用研究较多NK细胞在免疫调节中起到非特

中国实验诊断学2019年3月

第23卷第3期

383

进化，NK细胞的非特异性杀伤功能无法识别发生

异性杀伤肿瘤细胞的作用，NK细胞活化后通过细

胞因子发挥抗肿瘤作用，其机制是迅速分泌IFNp、

变化的T细胞。因此.在肿瘤的发生、发展过程中，

各淋巴细胞亚的比例会随着免疫微环境的改变而IFN-y、IL-2、GM-CSF等细胞因子，与此同时，NK

细胞可以对吞噬细胞的功能进行调节⑻。B细胞是

体内唯一能够产生抗体的细胞.在B淋巴细胞表面

发生变化，若想及时有效地反映机体的完整免疫状

态，有必要全面的结合其他因子进行联合检测u幻，

才

能更好地评估患者的病情与预后。

有许多种跨膜蛋白，CD19分子是其中一种糖基化I

型跨膜蛋白

，它能够调节B细胞的活化、增殖，并以

协同受体的形式参与B细胞的活化和信号转导过

程〔叭

综上所述.外周血中淋巴细胞亚及NK细胞

的变化对早期发现和早期诊断恶性肿瘤具有一定的

临床价值。通过检测不同淋巴细胞亚的变化情

本研究选择广西地区发病率和死亡率较高的恶

性肿瘤(肺癌、肝癌、腺癌、鼻咽癌)⑴

〕作为研究对

况.可以及时了解恶性肿瘤患者的免疫状态

。

参考文献：

象，用流式细胞仪对外周血淋巴细胞亚的变化进

[1](),ZeissigS,

ial

exposureduringearly

行检测。结果发现，肿瘤组与健康组比较.CD3+、

lifehas

persistenteffectsonnatural

killerTcellfunc-tion[J].Sci-

ence,2012,336(6080)：

489.

CD4+、CD19+细胞比例、CD4+/CD8+比值均低于健

康组，NK细胞比例高于健康组。说明肿瘤患者存

[2]严波，燕善军.恶性肿瘤患者腹水及外周血中CD4亠CD25+

CD1271ow调节性T细胞表达及其意义[J].实用医学杂志，

在免疫抑制状态，这种状态对机体识别和杀伤突变

细胞的能力产生了负面影响•引起免疫功能的失衡，

2010,26(9):1570.

[3]梁新强•刘海洲，唐亚梅，等.鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚

这与国内一些研究结果基本一致tI2-13]»已有研究表

明：肿瘤细胞微环境中存在许多能够抑制CD4+细胞

和NK细胞活性的检测及其意义[J].微创医学,2015,10(2)：

127.

[4]徐文中，刘春艳.过敏性鼻炎患儿淋巴细胞亚、血清IgE水平的

成熟、分化的免疫抑制因子，同时CD8+细胞比例上

升刚，CD4+/CD8+比值降低，使机体进入免疫抑制

状态，导致免疫功能紊乱.肿瘤细胞无法被正常清

除，促进了肿瘤细胞的增殖，使病情加速恶化「闵。在

变化及其相关性[J].

中国免疫学杂志

，2016,32(4):550.

[5]IwamotoK,Takahashi

H,HaraguchiN,-roscopicsur

geryforsigmoidcoloncanceraftermultipleopera-ti

including

urinarydiversionwithIndiana

pouch：acasereport[J].AsianJ

EndoscSurg,2017,10(4)：42O.

T淋巴细胞被抑制的同时，NK细胞比例有所升高，

说明NK细胞的免疫反应增强.提示肿瘤患者体内

的细胞免疫功能可能促进并激活了NK细胞的增

[6]宋振宇.外周血T淋巴细胞亚与免疫球蛋白检测在胃癌病情监

测及预后评价中的价值[J].

实用癌症杂志，2015,30(8):1126.

[7]徐本玲，袁龙，袁鹏

，等.胃癌患者外周及肿瘤组织中CD4+

殖。

本研究进一步发现，患有不同肿瘤的个体外周

T淋巴细胞上Tim-3的表达及其临床意义[J].

实用医学杂志，

2017,33(1):108.

[8]张风宾，乔静雪，王英南，等.PD4/PDL1在胃癌组织中的表达

血淋巴细胞比例有差异。其中鼻咽癌与其他肿瘤差

异较大，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例显著低于其

及其临床意义

[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2018,25(2):170.

[9]VujanovicNL,YasumuraS,HirabayashiH,et

mor

他肿瘤，NK细胞比例显著高于其他肿瘤。

腺癌

activitesofsubsetsofhumanIL-2-activatednaturalkillercells

in

solidtissues[J].JImmunol,1995,154(1)：281.

[10]钱印榕

，王福龙，王君，等.42例胃肠道肿瘤患者手术前后细胞

的CD4+/CD8+比例低于其他肿瘤。胃癌的CD3+

比例高于其他肿瘤，CD19+比例低于其他肿瘤。说

明恶性肿瘤细胞在生长、侵袭的过程中，由于组织来免疫功能的动态检测[J].

临床肿瘤学杂志，2007.12(9):666.

源、恶性程度等不同，导致细胞免疫功能也存在一定

的差异这与国内其他研究者的结果略有不

[11]李秋林

，余家华，容敏华，等.2014年广西肿瘤登记地区恶性肿瘤

发病和死亡分析[J].中国癌症防治杂志,2018,10(01):29.

[12]严健，原永明，张舒，等.CD3+、CD4+、

CD8+T淋巴细胞亚

同⑴如，可能与入选肿瘤的类别、样本量及地域差异

有很大关系。由于肿瘤来源的不同，有些肿瘤细胞

在肿瘤患者外周血中检测的临床意义[J].检验医学，2013,28

:901.(10)

[13]章梁君，钟锦莎，钟辉秀

，等.恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞免疫如鼻咽癌细胞，其表面特异性受体的结构与其他肿

瘤有很大差异，使其自身产生不同于其他肿瘤的免

表型检测的临床意义[J].国际检验医学杂志,2015,36(24)：

疫逃逸机制，在识别与结合靶点方面，效应性T细胞

失去了应有的准确性，反馈抑制了CD4+、CD8+细

胞等杀伤性淋巴细胞的增殖s〕。NK细胞比例升高

可能是由于T细胞在杀伤肿瘤的过程中不断增殖与

3565.

[14]GanesanAP,Johansson

M,

RuffellB,-infiltrating

regulatoryTcellsinhibitendogenouscytotoxicTCellrespeto

LungAdenocarcinoma[J].JImmunol,2013,191(4):2009.

[15]谭江峡.外周血T淋巴细胞亚与免疫球蛋白检测对肺癌病情

384

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诊断价值［J］.中国卫生标准管理

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(收稿日期:2018-10-11)

医药论坛杂志，2011,32(01):83.

［20］何文.外周血T细胞亚检测在恶性肿瘤中的应用［J］.河南

文章编号：1007-4287(2019)03-0384-03

肿瘤标志物、ProGRP、

及NSE联合检测在肺癌诊断中的应用

董芸，袁峥玺，姚原-

(上海交通大学医学院附属第九人民医院放疗科，上海201900)

摘要：目的通过体外分析检测血清中鳞状细胞癌抗原(SCCAg).细胞角蛋白19片段抗原

(Cyf21-1)、

癌胚抗原

(CEA)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)及神经元特异性烯醇化酶

(NSE)5种肿瘤标志物在健康体检者、肺良性疾病和

肺癌人中含量的差异，分析五种肿瘤标志物联合检测的可行性。方法回顾性分析2015年1月到2018年7月我

院相关科室收治明确诊断肺癌患者90例，肺良性病变患者90例•体检中心健康体检者

90例。通过收集三组数据进

行比较分析，对比5种肿瘤标志物独立诊断与联合诊断肺癌的敏感性和特异性。结果三组

SCC-Ag、Cyf21-l、CEA、

含量差异具有统计学意义

(P<0.05),健康对照组与肺癌组对比SCC-Ag、Cyf21-l、CEA、ProGRP、NSE

含量差异具有统计学意义(PV0.

05),

肺良性病变组与肺癌组对比五种标志物含量差异具有统计学意义(PV0.05),

小细胞肺癌组ProGRP

、NSE水平明显高于非小细胞肺癌组差异具有统计学意义(

PV0.05)；SCC-Ag、Cyf21-l、CEA、

联合检测敏感性高于单独检测

，但是联合检测特异性下降。结论

⑵-1、CEA、ProGRP

、

NSE在肺癌患者、健康体检者以及肺良性病变患者体内含量差异较为明显，五种肿瘤标志物的联合检测有利于肺癌

早期鉴别诊断。

关键词：SCC-Ag；

Cyf21-1

；CEA；ProGRP；NSE；联合检测；月市癌

中图分类号:R734.2

文献标识码：A

Applicationofcombined

detectionoftumormarkers・SCC-Ag,

cyf21-1・.

andNSEinthediagnosisoflung

Zhen^-jci

.YAC)Yuan.(DepartmeritojRadiationOncology,NO.9PeopleHospitalAf-

JiIia

tedtoShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine

»Shanghai201900China)

Abstract:ObjectiveDetectionoffivetypesoftumorsinserum:SCC-Ag,Cyf21-1,CEA,proGRP

andNSE

Differencesin

levelsofmarkersinhealthy

healthcheckupsJungdiseaseand

lung

sibility

of

jointdetectionoffivetumormark­

sRetrospectiveanalysis

of

90

casesof

lungcancer.90casesoflungbenignlesi,and90casesofphysical

exami-

ative

analysis

bycollecting

three

setsofdata,Sensitiv­

ity,specificityandaccuracyofindependentandcombined

sThecon­

tentsof

SCC-Ag,Cyf21-1,CEA,ProGRPandNSEinthreegroupswerestatisticallysignificantPV0.05),Thediffer

­

enceofSCC-Ag,Cyf21-1,andNSEwasstatisticallysignificantinthecontrolgroupandlungcancer

group(PV0.05).Thedifferencebetweenlungbenignlesiandlungcancerwasstatisticallysignificant(P

ProGRPandNSElevelswere

significantlyhigherin

smallcelllungcancergroupthanin

non-smallcelllungcancer

*通讯作者