利用病毒RNA结构形成结状结构

FMI的初级组长Jeff Chao和他的小组开发了一种测量单细胞中mRNA降解的复杂方法。他们开发了一种荧光生物传感器，可以区分完整的转录本和降解中间体。这种被称为TREAT的新方法很好地补充了他们之前开发的称为TRICK的方法，该方法用于测量蛋白质翻译。

RNA的生命始于细胞核，在细胞核中合成并进一步修饰 - 加帽，剪接和多腺苷酸化。然后它进入细胞质，在那里它被翻译成蛋白质，并最终降解。产生的蛋白质的量在很大程度上取决于转录的调节，但也取决于mRNA的丰度。作为FMI集团的领导者，Jeff Chao指出，“越来越明显的是，mRNA降解的调节，特别是在发育或快速环境变化过程中，可以显着影响RNA水平。”虽然已经对许多RNA降解步骤进行了表征，但到目前为止，已清楚地了解降解发生的时间和地点。

Jeff Chao和他的团队现在开发了一种荧光显微镜方法，可以测量活细胞中单个mRNA分子降解的空间和时间动态。

Chao和他的同事利用病毒RNA结构形成结状结构。这种假结可防止5'-3'外切核糖核酸酶Xrn1对mRNA的降解。Chao解释说：“在含有这些病毒假结的多色生物传感器的帮助下，我们能够区分完整的mRNA转录本和正在降解的mRNA转录本。”科学家将这种技术称为TREAT for 3(Three)' - 在营业额期间RNA终点积累。

首先也是最重要的是，TREAT允许科学家在活细胞中实时观察mRNA降解。为了可视化降解，科学家们设计了一个转录本，其标记有两个与两个不同荧光标签融合的RNA结合蛋白：一个蛋白质 - PP7(用绿色荧光蛋白标记) - 与mRNA的编码区结合，而其他 - MS2(带有红色标签) - 与3'非翻译区域结合。在PP7和MS2之间，科学家介绍了病毒伪结。如此标记，单个非翻译mRNA显示为黄色。当RNA被XRN1降解时，绿色标记的PP7被置换。然而，在伪结的位置处，XRN1降解停止，这允许检测从黄色到红色的可量化的颜色变化。

此外，Chao评论说：“使用TREAT，我们已经能够测量单个细胞中的mRNA衰变，并发现个体降解事件在细胞质中独立发生。降解的mRNAs不会在加工体中累积。”这些是重要的第一个见解，因为处理机构被认为在RNA降解中起直接作用。加工体是在相变期间形成的无膜隔室。它们由RNA结合蛋白和mRNA组成，并且由于它们含有许多参与mRNA转换的蛋白质，因此提出它们是RNA降解的细胞位点。

“TREAT很好地补充了我们之前开发的其他技术，称为TRICK。通过选择合适的荧光标记，我们现在可以监测RNA转换和RNA翻译'实时'，我们可以解决这些过程如何在单个细胞内相互连接， “赵说。

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