第17卷第9期

2015年9月

中国当代儿科杂志

ChinJContempPediatr

Vol.17No.9

Sep.2015

doi:10.7499/.1008-8830.2015.09.010

论著・临床研究

呼吸道吸出物

MP-DNA

检测对儿童肺炎

支原体肺炎诊断的临床意义

顾文婧1　张新星1　陈正荣1　严永东1　朱灿红1　黄莉1　王美娟1　邵雪君2　季伟1

（苏州大学附属儿童医院1.呼吸科；2.检验科，江苏苏州　215003）

［摘要］　目的　探讨鼻咽抽吸物（NPA）和肺泡灌洗液（BALF）中肺炎支原体（MP）

-

DNA

检测对儿

童MP肺炎（MPP）诊断的意义。方法　收集164例MPP患儿入院24h内的NPA及BALF，荧光定量PCR法检

测MP

-

DNA；同时在入院

24h内及治疗7~10d病情好转时采集所有患儿静脉血，ELISA法检测血清特异性MP

-

IgM。结果　164例患儿NPA的MP

-

DNA阳性检出率为51.8%，

低于双份血清MP

-

IgM阳性检出率（63.4%）（

P

=0.044），

两者检出一致性中等（

Kappa

=0.618，

P

<0.01）；BALF的MP

-

DNA阳性检出率为71.3%，与双份血清MP

-

IgM阳

性检出率比较差异无统计学意义（

P

>0.05），两者检出一致性好（

Kappa

=0.793，

P

<0.01）；NPA的MP

-

DNA阳

性检出率低于BALF（

P

<0.01），两者检出一致性中等（

Kappa

=0.529，

P

<0.01）。BALF中MP的中位拷贝数高

于NPA（

P

<0.01）。NPA和BALFMP

-

DNA的检出率均随病程延长有下降趋势（

P

<0.05），病程~2周及~4周

患儿BALFMP

-

DNA检出率高于NPA（

P

<0.05）。结论　BALF中MP

-

DNA

检出敏感性高，对临床早期诊断MPP

具有重要意义；而

NPAMP

-

DNA检测可能会引起漏诊。［中国当代儿科杂志，2015，17（9）：937-941］

［关键词］　肺炎支原体肺炎；支气管肺泡灌洗液；鼻咽抽吸物；儿童

ClinicalsignificanceofMP-DNAfromendotrachealaspiratesindiagnosisof

Mycoplasmapneumoniaepneumoniainchildren

GUWen-Jing,ZHANGXin-Xing,CHENZheng-Rong,YANYong-Dong,ZHUCan-Hong,HUANGLi,WANGMei-

Juan,SHAOXue-Jun,mentofRespiratoryDisease,Children'sHospitalAffiliatedtoSoochowUniversity,

Suzhou,Jiangsu215003,China(JiW,Email:szdxjiwei@)

Abstract:ObjectiveTocomparethedetectionratesofMycoplasmapneumoniae(MP)fromnasopharyngeal

aspirates(NPA)andbronchoalveolarlavagefluid(BALF)sAtotalof164

BALFofthesechildrenwerecollectedwithin24hours

ofadmission,andMP-DNAwasdetectedbyflbloodsamplesofallthesechildren

werecollectedwithin24hoursofadmissionandondays7-10oftreatment,andserumMP-IgMwasdetectedusing

sThepositiverateofMP-DNAinNAPofthe164caseswas51.8%,whichwaslowerthan63.4%as

thedetectionrateofMP-IgMinserum(P=0.044),andthetwodetectionratesweremoderatelycistentwitheachother

(Kappa=0.618,P<0.01).ThepositiverateofMPinBALFwas71.3%,whichwasnotsignificantlydifferentwiththatof

MP-IgMinserum(P>0.05),andthedetectionrateswerewellcistent(Kappa=0.793,P<0.01).ThedetectionrateofMP

inNPAwaslowerthanthatinBALF(P<0.01),withmoderatecistencybetweentwoofthem(Kappa=0.529,P<0.01).

ThemedianMPcopynumberinBALFwassignificantlyhigherthanthatinNPA(P<0.01).TheMPdetectionratesinNPA

andBALFweresignificantlydifferentamongdifferentcoursesofdisease(P<0.05).Asthecourseofdiseaseextended,the

MPdetectionratesinbothNPAandBALFshowedadecliningtrend;childrenwithMPpneumoniaof1-2weeks'duration

and2-4weeks'durationhadahigherMP-DNAdetectionrateinBALFthaninNPA(P<0.05).ConclusiMP-DNA

canceforearlydiagnosisofMPpneumonia,whileNPAMP-DNAtests

inBALFhasahighsensitivity,withagreatsigni

fi

mayleadtoamisseddiagnosis.[ChinJContempPediatr,2015,17(9):937-941]

Keywords:Mycoplasmapneumoniaepneumonia;Bronchoalveolarlavagefluid;Nasopharyngealaspirates;Child

［收稿日期］2015-01-21；［接受日期］2015-03-13

［基金项目］江苏省社会发展项目（BE2012652）。

［作者简介］顾文婧，女，硕士研究生。

［通信作者］季伟，女，主任医师，教授。

・937・

第17卷第9期

2015年9月

中国当代儿科杂志

ChinJContempPediatr

Vol.17No.9

Sep.2015

肺炎支原体肺炎（Mycoplasmapneumoniae

pneumonia,MPP）是最为常见的儿童社区获得性肺

炎。肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae,MP）是

儿童呼吸道感染最常见的病原之一[1]。近年来，

MP在儿童呼吸道感染中有逐年上升趋势，每3~

5年可发生一次大流行[2]。MP培养是诊断MP感

染的金标准，但由于MP培养要求高且耗时，因此

临床上多采用血清特异性抗体检测或PCR检测MP

感染[3]。MP

-

IgM阳性是诊断MP感染的主要实验

室指标，但MP

-

IgM一般在发病1周后才能检出，

且在免疫系统缺陷或发育不完善的患儿中假阴性

率高；荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高，特

异性强和检测时间短等优点，对MPP的早期诊断

起到了很大的作用，与普通PCR相比，减少了扩

增产物污染的机会，提高了检测特异性[4]。目前临

床普遍采用鼻咽抽吸物（nasopharyngealaspirates,

NPA）行MP

-

DNA检测，其结果目前尚存在争议。

近年来随着支气管镜术在儿科的逐渐开展，经支

气管镜行支气管肺泡灌洗，从支气管肺泡灌洗液

（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中获得病原微

生物检测结果，被认为具有直接、可靠、敏感的

优点，对指导MPP患儿的诊疗价值备受关注[5]。

目前对NPA与BALF的MP

-

DNAPCR检测

在MPP中的诊断价值的研究资料尚少。本研究

对2013年4月至2014年3月间在我院呼吸科住

院治疗的164例肺炎患儿，在采集NPA的同时因

诊治需要采集BALF，并将NPA和BALF行MP

-

DNAPCR检测，并将检测结果与血清学比较，求

证NPA和BALF的MP

-

DNA检测对MPP诊疗的临

床意义。

55例，~2周有51例，~4周有26例，病程>4周

有32例。

研究对象纳入标准：（1）年龄在1个月至

14岁；（2）因呼吸道感染入院，临床疾病诊断标

准依据《诸福棠实用儿科学》第7版[6]；（3）入院

24h内及出院前因诊治需要行血清MP

-

IgM检测；

（4）经门诊治疗或住院治疗5~7d，临床症状、

体征或/和影像学检查无明显改善或反复咳喘时间

较长而行电子支气管镜检查及肺泡灌洗术治疗的

患儿；（5）住院期间同一天采集NPA和BALF。

本研究获得医院医学伦理委员会批准；每位

患儿采集NPA及BALF标本时均告知家属，并签

署知情同意书。

1.2　标本采集

入院24h内用一次性吸痰管送入患儿鼻腔

7~8cm，

利用

负压吸取NPA1~2mL；BALF收

集方法为在电子支气管镜到达病变局部时进行灌

洗，灌洗部位都选择病变重的肺段，0.9%氯化钠

溶液（体重≤20kg者每次灌洗量1mL/kg，体重

>20kg者每次灌洗量2mL/kg）进行支气管肺泡灌

洗，以负压10~15mmHg进行抽吸以获取BALF。

入院24h内及治疗7~10d病情好转时采集所有患

儿静脉血。

1.3　实时荧光定量PCR法检测NPA及BALF

中

MP

-

DNA

取NPA

及BALF标本，经震荡、离心、去上

清，再加入裂解液提取

DNA，进行PCR扩增，引

物及探针来自广州中山大学达安基因股份有限公

司。探针结合序列位于上游引物与下游引物之间。

在特异性杂交荧光探针的5'端结合荧光发光基团，

在3'端结合荧光吸收基团。将样品（标本和质控品）

上清液2

μ

L或阳性定量参考品直接加入反应管中，

12000r/min离心5min，放人仪器样品槽。PCR反

应条件：93℃预变性2min；93℃变性45s，55℃

退火60s，10个循环；93℃变性30s，55℃退

火45s，30个循环。荧光采集点设置为55℃退火

45s阶段。荧光定量PCR的结果以Ct值显示，反

应结束电脑自动分析结果。结果判定：（1）Ct值

≥39，实验结果为阴性；（2）Ct值<38，实验结

果为阳性；（3）Ct值在38~<39时，进行重复测

定。仪器为美国BIO

-

RAD公司的Icycleriq荧光定

量PCR仪。

938・

1　资料与方法

1.1　研究对象

选取2013年4月至2014年3

月期间于我院

呼吸科就诊的164例MPP患儿为研究对象，其

中男98例（59.8%），女66例（40.2%）；年龄

2个月至14岁，平均年龄4.6±2.0岁，其中<1岁

24例（14.6%），1岁~34例（20.7%），3岁~

63例（38.4%），≥7岁43例（26.2%）；支气管

肺炎60例（36.6%），大叶性肺炎104例（63.4%）。

164例患儿中，发病至入院采集标本病程≤1周有

・

第17卷第9期

2015年9月

中国当代儿科杂志

ChinJContempPediatr

Vol.17No.9

Sep.2015

1.4　ELISA法检测血清MP

-

IgM

试剂盒购自德国欧蒙医学实验诊断股份有限

公司。取患儿外周血1~2mL，常规离心，取血

清

10

μ

L，用样本缓冲液1

:

101稀释，充分混匀后

加入抗原包被的微孔板上的微量孔中，同样把标

准血清和对照血清各100

μ

L加入微量孔中，室温

（18~25℃）下温育30min；清洗缓冲液洗涤3遍

后加入100

μ

L过氧化物酶标记的羊抗人IgM抗体，

室温温育30min；倒掉微孔板内液体，洗涤3遍

后，滴加100

μ

L原/底物液至每一微孔，避光

温育15min。以与加原/底物液相同的速度和顺

序滴加100

μ

L终止液至每一微孔。终止后酶标仪

450nm波长处测吸光度D值。计算样本和标准品

D值的比值，通过比值半定量判断MP

-

IgM结果。

比值>1.1为阳性，0.8~1.1为可疑，<0.8为阴性。

对出院时复查的血清MP

-

IgM较入院时第一次检测

的血清MP

-

IgM值增高1.5倍或以上诊断为MP急

性感染

。

1.5　统计学分析

采用SPSS18.0统计软件包对数据进行统计学

分析，计量资料以中位数（范围）表示，两组间

比较采用Wilcoxon秩和检验。计数资料采用百分

率（%）表示，各组阳性率比较采用卡方检验或

Fisher确切概率法。一致性比较采用四格表

χ2检验，

以血清MP抗体检测结果为标准计算

Kappa

值。

Kappa

值越大说明一致性越好，

Kappa

值>0.75表

示两者一致性好；

Kappa

值在0.40~0.75间表示

一致性中等；

Kappa

值<0.40表示一致性较差。

P

<0.05为差异有统计学意义。

[7]

表1　双份血清MP

-

IgM及NPAMP

-

DNA检出结果比较

[

n

=164，

n

（%）]

NPAMP

-

DNA

阳性

阴性

合计

双份血清MP

-

IgM

阳性

79(48.2)

25(15.2)

104(63.4)

阴性

6(3.7)

54(32.9)

60(36.6)

合计

85(51.8)

79(48.2)

164(100)

注：NPA：鼻咽抽吸物；MP：肺炎支原体。

双份血清MP

-

IgM和BALFMP

-

DNA同时阳性

103例（62.8%），两者检出一致性好（

Kappa

=0.793，

P

<0.001），两者阳性检出率差异无统计学意义

（

χ2=2.344，

P

>0.05）。见表2。

表2　双份血清MP

-

IgM及BALFMP

-

DNA检出结果比较

[

n

=164，

n

（%）]

BALFMP

-

DNA

阳性

阴性

合计

双份血清MP

-

IgM

阳性

103(62.8)

1(0.6)

104(63.4)

阴性

14(8.5)

46(28.1)

60(36.6)

合计

117(71.3)

47(28.7)

164(100)

注：BALF：支气管肺泡灌洗液；MP：肺炎支原体。

NPA和BALFMP

-

DNA同时阳性82例

（50.0%），两者检出一致性中等（

Kappa

=0.529，

P

<0.001），两者检出阳性率差异有统计学意义

（

χ2=54.500，

P

<0.001）。见表3。

表3　NPAMP

-

DNA及BALFMP

-

DNA检出结果比较

[

n

=164，

n

（%）]

BALFMP

-

DNA

阳性

阴性

合计

NPAMP

-

DNA

阳性

82(50.0)

3(1.8)

85(51.8)

阴性

35(21.4)

44(26.8)

79(48.2)

合计

117(71.3)

47(28.7)

164(100)

2　结果

2.1　MP检出情况

164例患儿中，双份血清MP

-

IgM

检出阳性

104例（63.4%），NPA的MP

-

DNA检出阳性85

例（51.8%），BALF的MP

-

DNA检出阳性117例

（71.3%）。其中，三者均为阳性的78例（47.6%），

三者均为阴性的34例（20.7%）。

双份血清MP

-

IgM和NPAMP

-

DNA同时阳性

79例（48.2%），两者检出一致性中等（

Kappa

=0.618，

P

<0.001），两者阳性检出率差异有统计学意义

（

χ2=4.507，

P

=0.044）。见表1。

・

注：NPA：鼻咽抽吸物；BALF：支气管肺泡灌洗液；MP：肺

炎支原体。

2.2　NPAMP

-

DNA与BALFMP

-

DNA拷贝数比较

164例肺炎患儿中，NPA的MP

-

DNA

中位拷贝

数为1.27×105（0~2.50×107），BALF的MP

-

DNA

中位拷贝数为3.29×106（3.29×103~2.50×107），两

者比较差异有统计学意义（

Z

=3.155，

P

=0.002）。

939・

第17卷第9期

2015年9月

中国当代儿科杂志

ChinJContempPediatr

Vol.17No.9

Sep.2015

2.3　不同病程患儿NPA和BALF中MP检出率

比较

NPA和BALFMP

-

DNA

的检出率在不同病程

患儿中差异有统计学意义（

P

<0.05），且均随着病

程延长有下降趋势；其中NPAMP

-

DNA检出率在

病程2周以上的患儿中较病程在2周及以下的患

儿明显下降（

χ2=31.100，

P

<0.001）。

病程≤1周和>4周患儿中，BALF中MP

-

DNA的检出率和NPA中MP

-

DNA的检出率比较

差异均无统计学意义（均

P

>0.05）；病程在~2周

和~4周患儿中，BALF中MP

-

DNA的检出率均高

于NPA中MP

-

DNA的检出率（均

P

<0.05）。见表4。

表4　不同病程患儿NPA和BALFMP

-

DNA阳性检出比较

[

n

（%）]

标本

NPA

BALF

χ

值

P

值

2

免疫功能影响[1]。

研究结果显示，BALF中MP检出阳性率

为71.3%，双份血清MP特异性抗体阳性率为

63.4%，均高于NPA中MP阳性率51.8%。以双份

血清MP特异性抗体滴度4倍升高作为金标准，双

份血清MP检出阳性率明显高于NPA中MP的检

出率，两者的一致性中等。既往有研究报道双份

血清MP特异性抗体阳性率均高于NPAMP

-

DNA

PCR，与此研究结果相一致[2

-

3]。因而，若临床上

单纯以NPA

-

MP检测结果作为参考，可能会引起

MPP的漏诊，从而不利于MPP的及时治疗。而

与双份血清抗体检出率相比，BALF中MP检出率

与之相比并无明显差异，且两者的一致性较好。

但BALFMP

-

DNAPCR可早期诊断MP感染，便于

MPP患儿早期治疗，因而优于双份血清MP特异

性抗体的检测，临床上检测BALF中MP非常有必

要[13]。而对于MP

-

DNAPCR，以BALF为标本与

NPA相比，两者检出一致性中等，但BALF中检

出率明显高于NPA，这与Xu等[14]研究结果有所

不同，但与研究组既往研究结果相一致，可能原

因是存在于上呼吸道中的MP较下呼吸道中MP更

容易清除，但具体原因有待于研究进一步证实。

本研究中BALF中的MP拷贝数较NPA中更

高，可能原因为下呼吸道的局部微环境更适合MP

的生存，也支持自身防御系统或抗MP药物更容易

将上呼吸道中MP清除。既往已有研究证实高拷贝

数的MP是支持MP感染临床诊断的依据[4,15]，因

而BALF中高拷贝数的MP更支持MP感染。

研究显示NPA中病程在≤1周、~2周、~4周、

超过4周MP的检出率分别为69%、67%、35%、

12%，随着病程的推移，MP检出率逐渐下降。黄

淑媛等[12]研究认为MP

-

DNA在发病初期的阳性率

较高，随着治疗和病情的转归，阳性率迅速下降

转阴，表明MP

-

DNA可以直观地反映MP在体内感

染和复制的情况，与此研究结果一致。Kashyap等

[16]

≤1周~2周

(

n

=55)(

n

=51)

38(69)

45(82)

2.405

>0.05

34(67)

44(86)

5.449

0.034

~4周

(

n

=26)

9(35)

18(69)

6.240

0.025

>4周

(

n

=32)

4(12)

10(31)

3.291

>0.05

χ2值

33.972

-

-

P

值

<0.001

-

-

33.729<0.001

注：NPA：鼻咽抽吸物；BALF：支气管肺泡灌洗液。

3　讨论

MP是一种介于病毒与细菌之间，可以独立存

活的微生物，其通过飞沫进行传播，是引起儿童

呼吸道感染的重要的病原体之一

。MPP可占儿

童肺炎的1.3%~50%不等[8]，尤其以婴幼儿以及学

龄期儿童多见[3]。MPP临床表现多样，且病情轻

重不同，具有病程长、易反复等特点，且容易发

生肺外并发症，对其进行早期诊断有着重要的临

床意义[9

-

10]

[3]

。传统的分离培养以及抗体检测是实验

室诊断MPP的金标准[11]，但MP培养条件要求严

格，且阳性率低；而特异性抗体受患儿免疫功能

影响，且高峰出现较晚，如果第一份血清采集过早，

可能导致假阴性，不利于早期诊断[12]。PCR诊断

研究也认为MP

-

DNA动态变化，可以为临床动

技术自1985年问世以来，已广泛应用于医学及生

物学的各个领域。非MP感染患者咽部极少带有该

病原体，为该检测的准确性提供了保证。荧光定

量PCR具有检测快、灵敏度高等优点，更能够对

病原体进行准确定量，有助于临床早期诊断，弥

补了MP

-

IgM高峰出现时间晚等不足，且不受患儿

・

态观察治疗效果提供依据。在病程≤1周患儿的

BALF中MP检出率与NPA检出率比较差异无统计

学意义，而病程~2周与~4周的患儿BALF中MP

检出率仍高达86%、69%，BALF中MP检出率均

明显高于NPA，但当病程超过4周时，两者检出

率差异也并不明显。提示在起病初期（≤1周），

940・

第17卷第9期

2015年9月

中国当代儿科杂志

ChinJContempPediatr

Vol.17No.9

Sep.2015

患儿机体自身防御系统或抗MP药物尚未完全对

MP清除，因而BALF与NPA中MP检出的敏感

性相同，而随着时间的推移，患儿上呼吸道中MP

逐渐被清除，而下呼吸道中MP依然存在，因而

BALF中MP的检出率要明显高于NPA，范丽萍等

[17]

道肺炎支原体感染诊断中的应用[J].临床儿科杂志,2009,

27(7):625

-

628.

[4]

张晓波,陆爱珍,王立波,等.肺炎支原体荧光定量聚合酶

链反应在肺炎支原体感染中的诊断评价[J].中华儿科杂志,

2008,46(6):442

-

445.

[5]

[6]

[7]

刘玺诚.努力发展和推广儿科支气管镜术[J].临床儿科杂志,

2009,27(1):7

-

11.

胡亚美,江载芳,主编.诸福棠实用儿科学[M].第7版,北

京人民卫生版社,2002:1167

-

1175.

GuoQ,LiHY,ZhouYP,atiofradiological

featuresinMycoplasmapneumoniaepneumonia[J].ArchMed

Sci,2014,10(4):725-732.

[8]LiuFC,ChenPY,HuangF,iagnosisof

Mycoplasmapneumoniaeinfectioninchildrenbypolymerase

chainreaction[J].JMicrobiolImmunolInfect,2007,40(6):507-

512.

[9]

高炳杰,孙志荣,张玉芹,等.小儿喘息性疾病与肺炎支原

体感染关系的研究[J].中国当代儿科杂志,2001,3(3):325

-

326.

[10]AkihiroT,KousakuM,TakayukiT,prednisolone

pulsetherapyforrefractorymycoplasmapneumoniae

pneumoniainchildren[J].JInfect,2008,57(3):223-228.

[11]WaitesKB,BalishMF,ightsintothe

pathogenesisanddetectionofMycoplasmapneumoniae

infection[J].FutureMicrobiol,2008,3(6):635-648.

[12]

黄淑媛,覃川平,黎伟霞,等.MP

-

DNA、MP

-

IgM及MP

-

IgG

在儿童肺炎支原体感染中的动态变化[J].中国当代医药,

2014,21(4):95

-

97.

[13]

成云改,李淑娴,李雪静,等.肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌

洗液病菌量与临床特征相关性研究[J].中华儿科杂志,2013,

51(10):736

-

740.

[14]XuD,LiSX,ChenZM,ionofMycoplasma

pneumoniaeindifferentrespiratoryspecimens[J].EurJPediatr,

2011,170(7):851-858.

[15]

张永峰,王永芹.荧光定量PCR对儿童肺炎支原体感染早期

诊断和临床意义[J].山东医药,2011,51(35):78

-

79.

[16]KashyapB,KumarS,SethiGR,isonofPCR,

culture&serologicaltestsforthediagnosisofMycoplasma

pneumoniaeincounityacquiredlowerrespiratorytract

infectiinchildren[J].IndianJMedRes,2008,128(2):134-

139.

[17]

范丽萍,孙惠泉,黄莉,等.儿童支原体肺炎肺泡灌洗液检

测与临床关系探讨[J].临床肺科杂志,2013,18(10):1755

-

1757.

（本文编辑：万静）

一项研究结果也证实在病程8~60d时BALF中

仍可检出MP的存在，也进一步支持此次实验研究

结果。当病程超过4周时，患儿上下呼吸道中MP

均逐渐被清除，因而BALF与NPA中MP检出率

比较并无明显差异。

研究结果显示BALFMP

-

DNAPCR检出率与

双份血清MP特异性抗体滴度4倍升高相比，一致

性好，检出率无明显差异，但较双份血清相比，

BALFMP

-

DNAPCR可早期诊断MP感染，较双份

血清特异性抗体检测具有优势。而NPAMP

-

DNA

PCR检出率与双份血清特异性抗体相比，一致性

中等，且低于双份血清特异性抗体的检出率，易

引起漏诊。对于病程较长的患儿，以BALF为标本

行MP

-

DNAPCR检测更具有优势。

虽然BALF较NPA的MP

-

DNAPCR检出率高，

但临床上BALF获取较NPA困难，故NPA

-

MP检

测仍然是诊断MPP的重要循证医学依据；BALF

MP

-

DNAPCR检出率及拷贝数均明显高于NPA，

故对于临床上行支气管镜检查的患儿，收集BALF

检测MP非常有必要，尤其是NPA

-

MP及第一份血

清MP特异性抗体检出阴性者，BALFMP

-

DNA检

测可帮助临床诊治。

［参　考　文　献］

[1]

[2]

朱中梁,马娟,汪洪良.两种方法检测肺炎支原体的对比研

究[J].临床肺科杂志,2013,18(5):886

-

888.

赵茹,黄莉,季伟.双份血清MP抗体及痰MP

-

PCR检测

在儿童肺炎支原体感染诊断中的价值[J].江苏医药,2008,

34(12):1282

-

1283.

[3]

季伟,陈正荣,张爱丽,等.荧光PCR和定量ELISA在呼吸

・941・