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广东医学

2012

年

1

月第

33

卷第

2

期

GuangdongMedicalJournalJan．2012，Vol．33，No．2

培养法主动免疫治疗不明原因习惯性流产

56

例

11211111张智

，

张珍

，

高天旸

，

李楠

，

李亚红

，

严芳

，

李泽泳

，

邱厚匡

2

1广东省第二人民医院实验中心

，

生殖中心

（

广州

510317）

【

摘要

】

目的探讨淋巴细胞分离后直接注射与经培养后注射对不明原因习惯性流产

（UHA）

患者进行主动

选择

124

例

UHA

患者

，

取患者丈夫或无血缘关系的健康第三者静脉血淋巴细胞于

经治疗后第

1

组成功率为

91.3%，

主动免疫治疗

UHA

的临床疗

免疫治疗的临床疗效

。

方法

孕前

、

孕中注射入患者前臂

，

使之产生主动免疫

。124

例患者平均分成两组

，

第

1

组分离淋巴细胞直接注射

；

第

2

组分离淋巴细胞经体外培养

5～7d

后注射

，

获得

109

例妊娠随访结果

。

结果

提高效率

。

效显著

。

培养法可简化疗程

，

【

关键词

】

习惯性流产

；

培养法

；

免疫治疗

第

2

组成功率为

91.7%，

两组比较差异无统计学意义

（P＞0.05），

无畸形儿

。

结论

不明原因习惯性流产

（UHA）

是指连续发生

3

次或

3

次以上的流产

，

其发生率约为

1%，

是常见的妊娠并

主要有遗传

、

内分泌

、

子宫发症之一

。UHA

病因复杂

，

异常

、

感染

、

免疫等因素

，

其中免疫因素占

50%～60%。

目前国内治疗此类患者以常规中药安胎保胎治疗为

主

，

疗效不一［1］

Y

染体缺失

）；

前列腺检查

；

感染性疾病检查型分析

、

（

乙型肝炎

、

丙型肝炎

、

庚型肝炎

、

单纯疱疹病毒

、

巨细

胞病毒

、

梅毒

、

艾滋病

）；

性传播疾病检查

（

淋病

、

解脲

支原体

、

沙眼衣原体

、

尖锐湿疣

）。

1．4．2

女方染体核型分析

；

盆腔

B

超

、

子宫输卵

管造影

、

诊断性刮宫

；

内分泌功能检查

（

性激素六项

：

黄

促卵泡激素

、

雌二醇

、

孕酮

、

泌素

、

睾酮以体生成素

、

及甲状腺功能检查

）；

传染性疾病检查

（

弓形虫

、

风疹

病毒

、

单纯疱疹病毒

、

巨细胞病毒

，

解脲支原体和沙眼

抗衣原体

）；

自身免疫性疾病检查

（

抗子宫内膜抗体

、

心磷脂抗体

、

抗精子抗体

、

抗卵巢抗体

、

抗

HCG

抗体

、

ENA

七项

、

抗核抗体

、

抗

dsDNA

抗体

、

抗

ABO

血型抗

体

）；

封闭抗体检查

。

。

主动免疫治疗原理是采用小剂量父

使母体产生针对父系抗原的封系抗原反复免疫母体

，

闭抗体

，

维持正常妊娠周期

。

我们自

2006

年以来

，

对

对

UHA

患者进行习惯性流产病例建立常规病因筛查

，

主动免疫治疗

，

并比较淋巴细胞直接注射以及经培养

有望使疗程简化及标后注射对

UHA

患者的疗效

，

准化

。

1

1．1

资料与方法

一般资料本研究对象为我院生殖中心

2006

年

1．5

1．5．1

治疗方法

淋巴细胞制备夫妻双方对主动免疫治疗有

10

月至

2010

年

12

月连续流产

3

次或

3

次以上患者

，

年龄

22～37

岁

，

平均

（26.65±2.96）

岁

；

流产时孕周为

5～10

周

，

平均

（6.5±1.32）

周

，

诊断为习惯性流产

232

例

，

有

124

例未找到明显病因

，

诊断为

UHA。

将

124

例

患者平均分两组

，

组间年龄

、

孕史等差异无统计学意义

（P＞0.01）。

见表

1。

表

1

组别

第

1

组

第

2

组

例数

62

62

两组患者一般情况比较

x±s

珋

乐意接受治疗并签订知情同意书

。

主动免充分了解

，

疫原首选丈夫淋巴细胞

，

亦可为无关的健康个体

。

抽

取供者外周血

20～30mL

肝素抗凝

，

用生理盐水等体

积稀释

，

取淋巴细胞分离液置于灭菌离心管内

，

将丈夫

分离液与血液体积比为血沿管壁缓慢加入离心管

，

1∶2，

离心分离淋巴细胞

。

用无菌吸管轻轻吸取中间白

膜层

，

生理盐水洗涤

3

次

。

1．5．2

免疫方法7第

1

组直接将总数约

（2～4）×10

年龄

（

岁

）

27．14±2．87

26．16±3．04

流产次数

（

次

）

流产时孕周

（

周

）

4．69±1．13

4．72±1．06

6．7±1．29

6．3±1．35

的淋巴细胞悬液

2～3mL，

在女方左右手臂皮内注射

，

共

6～8

个点

。

第

2

组将收集的淋巴细胞加入

RPMI

25

μ

g/mLPHA，1640

培养基

（

含

1000U/mLIL－2，

10%

自体血浆或正常人

AB

型血清

），

置于饱和湿度

，

37℃、5%CO

2

培养箱中培养

。

根据细胞生长状况

2～

3d

换液

1

次

，5～7d

后

，

培养细胞经内毒素

、

细菌培

养

、

真菌培养及支原体检测阴性后收获细胞

，

台盼蓝染

7细胞活率≥

85%。

取

（2～4）×10

淋巴细胞进行皮

1．2

1．3

患者一般情况

试剂

患者现病史

、

既往史

、

月经史

、

家

族史及配偶一般情况无异常

。

淋巴细胞分离液购自天津灏洋公司

，

植物

IL－2

购自北京四环血凝素

（PHA）

为美国

Sigma

产品

，

PRMI1640

培养基系美国

GBICO

公司制药有限公司

，

产品

，

封闭抗体检测试剂盒系美国

OneLambda

公司

产品

。

1．4

1．4．1

常规检查

男方精液常规

；

遗传性疾病检查

（

染体核

4

次为

1

个内注射

。

两组每次治疗间隔均为

1～2

周

，

治疗过程中避孕

。

疗程结束后

2

周复查封闭抗疗程

，

体

，

无论封闭抗体阳性与否均计划受孕

，

如获妊娠则马