齐齐哈尔医学院学报２０１０年第３］卷第１５期　

结肠癌与直肠癌的ＭＶＤ对比研究　

赵坤杜金荣　

【摘要】　目的　本实验应用抗ＣＤ３４单克隆抗体标记大肠癌血管内皮细胞，测定微血管密度，进行　

结肠癌和直肠癌的对比研究，探讨微血管生成在两部位肿瘤中的差异，从而为评估大肠癌的发生发展、　

治疗及预后提供理论依据。方法　选择２００２年１月～２００４年１月问齐齐哈尔医学院附属第三医院收　

治的结肠癌患者４５例和直肠癌患者４３例进入本研究。按病变部位分为直肠癌与结肠癌两组。按照肿　

瘤分化程度、淋巴结转移情况、ｄｕｋｅｓ分期等对直肠癌与结肠癌的ＭＶＤ值进行对比，应用ＳＰＳＳ　１３。０统　

计分析软件进行处理，并用ｔ检验及Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ生存分析作统计。结果　直肠癌组与结肠癌组　

ＭＶＤ比较，在相同的分化程度下，发生淋巴结转移的直肠癌与结肠癌，ｄｕｋｅｓ分期Ｃ期和Ｄ期的直肠癌　

与结肠癌ＭＶＤ有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。对直肠癌与结肠癌生存时间进行比较，用　。检验　一５．　

０９７，Ｐ一０．０２４，ｄＯ．０５有统计学意义。结论ＣＤ３４在结直肠癌组织新生血管有良好表达．可以作为　

结直肠癌血管生成标记物用于结直肠癌ＭＶＤ计数有价值的标志物。在有淋巴转移的结直肠癌组织，　

直肠癌的微血管密度高于结肠癌，且直肠癌患者的预后较结肠癌患者差。　

【关键词】结肠癌　直肠癌　微血管密度　

大肠癌根据解剖部位划分可分为结肠癌和直肠癌。直肠　

癌是乙状结肠直肠交界处至齿状线之间的癌，与结肠癌统称　

温度达到９８℃，保持５分钟后关火，移离火源，自然冷却至４０　

℃，入ＰＢＳ洗３次，每次５分钟；３）加过氧化物酶阻断溶液，　

为大肠癌，在我国近２Ｏ年来，尤其在大城市，发病率明显上　

升。目前国内外研究的热点集中在肿瘤组织内血管生成的研　

究上。恶性肿瘤细胞的增殖离不开血管的生成，肿瘤生长和　

转移需要新生血管提供营养成分。本研究应用抗ＣＤ３４单克　

隆抗体标记大肠癌血管内皮细胞，测定微血管密度，进行结肠　

以阻断内源性过氧化物酶活性，室温下孵育１Ｏ分钟，ＰＢＳ洗　

３次，每次５分钟；４）加非免疫性动物血清，以封闭非特异性　

反应，室温下孵育１Ｏ～１５分钟；５）吸去多余血清，滴加一抗，　

３７℃孵育６Ｏ分钟（或４℃过夜），ＰＢＳ洗３次，每次５分钟；６）　

加链亲和素一过氧化物酶溶液，室温孵育１０～１５分钟，ＰＢＳ　

癌和直肠癌的对比研究，探讨微血管生成在两部位肿瘤中的　洗３次，每次５分钟；７）ＤＡＢ显：新鲜配制的ＤＡＢ５０扯ｌ，发　

１Ｏ～２０分钟，充分水洗；８）自来水冲洗，苏木精复染，弱氨　

水返蓝；９）梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。　

１．４　对照免疫组织化学染过程中，以ＰＢＳ代替…抗作阴　

性对照，用已知ＣＤ３４阳性的大肠癌组织切片作阳性对照。　

１．５微血管定量方法　微血管密度（ＭＶＤ），即单位面积的　

微血管数目。参照Ｗｅｉｄｎｅｒ标准，微血管的判定不以是否形　

差异，从而为评估大肠癌的发生发展、治疗及预后提供理论依　

据。报道如下。　

１　临床资料与方法　

１．１　一般资料选择２００２年１月～２００４年１月间齐齐哈尔　

医学院附属第三医院收治的结肠癌患者４５例和直肠癌患者　

４３例进入本研究。按部位分为直肠癌与结肠癌两组。所选　

患者年龄５０～６１岁，其中男性直肠癌患者３１例，结肠癌患者　

３３例；女性直肠癌患者１２例，结肠癌患者１２例。所有患者　

术前均未接受化疗、放疗或其他针对肿瘤的治疗。所有病例　

无术中死亡，术后均行化疗治疗并对晚期直肠癌患者进行了　

放疗治疗。全部病例均经手术和病理证实。５年后随访直肠　

成管腔或管腔内有无红细胞为计数单位，凡呈现与邻近的微　

血管明显分离，染阳性（棕）的单个内皮细胞或内皮细胞　

簇均作为一个血管计数，凡管腔大于８个红细胞，及带较厚肌　

层的血管均不记入微血管范围内。４Ｏ倍镜下确定５个不重　

复新生血管最密集区，即“热点”，再于１００倍视野下利用计算　

癌患者２５人生存，结肠癌患者３５人生存。　

１．２材料主要试剂：鼠抗人ＣＤ３４单克隆抗体，ｓ—Ｐ免疫　

组化试剂盒（单染），均由福建迈新生物技术开发有限公司提　

机自动扫描整张切片，选定热点区域记录每个密集区中一个　

视野内的微血管数，以同一张切片５个选定区域视野内微血　

管数的平均值表示所要测量的微血管密度。　

供；所有抗体均为既用型。　

１．３　染方法及步骤免疫组织化学染采用Ｓ—Ｐ法，其　

步骤如下：１）石蜡切片常规脱蜡、水化后，用ＰＢＳ冲洗３次，　

每次５分钟；２）将切片置入盛有抗原修复液的容器中，加热至　

作者单位：哈尔滨医科大学第二附属医院病理科研究生

哈尔医学院病理教研室（赵坤）　

哈尔滨医科大学第二附属医院病理科研究生导师（杜金荣）　

邮　编　１５００００　收稿日期　２０１０…０６—１２　

（注：计算机自动记数的ＭＶＤ值略高于人工记数，但记　

数恒定，客观性较强）。　

２结果　

两组患者临床资料按照肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、　

ｄｕｋｅｓ分期对直肠癌与结肠癌的ＭＶＤ值进行对比，应用　

工作于齐齐　ＳＰＳＳ１３．０统计分析软件进行处理，并用ｔ检验及Ｋａｐｌａｎ—　

Ｍｅｉｅｒ生存分析作统计。　

直肠癌组：低分化程度者３例；中分化程度者３４例；高分　

化程度者６例。淋巴结有转移者２２例；无淋巴结有转移者　

［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，１９９１．４７（１）：７—１１　

［１３３　Ｙｏｓｈｉｈａｒａ　Ｍ．Ｓｕｍｉｉ　Ｋ，Ｈａｒｒｍａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　

ｐｅｐｓｉｎｏｇｅｎ　Ｉ　ａｎｄ　Ｉ１　ｗｉｔｈ　ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ａｄｅ—　

［１１］　Ｋｏｄｏｉ　Ａ，Ｙｏｓｈｉｈａｒａ　Ｍ，Ｓｕｍｉｉ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｒｕｍ　ｐｅｐｓｉｎｏｇｅｎ　ｉｎ　

ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｆｏｒ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１９９５，３０（４）：　

４５２—４６Ｏ　

［１２］Ｆａｒｉｎａｔｉ　Ｆ，Ｈｏｌｍｏｇｒｅｎ　Ｊ，Ｄｉ—ＭａｒｉｏＦ，ｅｔ　ａ１．ＣＡ５０　ｄｅｔｅｍｉｎａｔｉｏｎ　

ｉｎ　ｂｏｄｙ　ｆｌｕｉｄｓ：ｃａｎ　ｗｅ　ｓｃｒｅｅｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｔ　ｒｉｓｋ　ｆｏｒ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ？　

ｎｏｍａ　ｉｎ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１９９８，９３　

（７）：１　０９０—１　０９６