目录

第一章绪论……………………………………………………………………………一１

１．１胶原蛋白概况…………………………………………………………………．１

１．１．１胶原蛋白的结构…………………………………………………………１

１．１．２胶原蛋白的分布及来源…………………………………………………１

１．１．３胶原蛋白的提取方法及多肽的制备……………………………………２

１．２胶原蛋白的应用与研究现状…………………………………………………．２

１．２．１胶原蛋白在食品、医药中的应用………………………………………２

１．２．２胶原蛋白在美容和品中的应用……………………………………３

１．２．３胶原蛋白的研究现状……………………………………………………４

１－３本论文的选题意义及主要研究内容…………………………………………．６

第二章罗非鱼皮酶法脱脂工艺条件的优化…………………………………………．．７

２．１材料与试剂……………………………………………………………………．７

２．２仪器与设备……………………………………………………………………．７

２．３实验方法及内容………………………………………………………………．７

２．３．１罗非鱼皮基本成分的测定………………………………………………７

２．３．２罗非鱼皮中胶原蛋白含量的测定………………………………………７

２．３．３鱼皮胶原蛋白的提取工艺流程…………………………………………８

２．３．４罗非鱼皮脱脂率的测定…………………………………………………９

２．３．５罗非鱼皮酶法脱脂单因素实验…………………………………………９

２．３．６罗非鱼皮酶法脱脂工艺条件的响应面优化…………………………．１０

２．３．７脱脂罗非鱼皮胶原蛋白提取率的测定………………………………．１０

２．４实验结果及分析………………………………………………………………１０

２．４．１罗非鱼皮基本成分……………………………………………………１０

２．４．２罗非鱼皮酶法脱脂单因素实验…………………………………………１１

２．４．３罗非鱼皮酶法脱脂工艺条件的响应面优化…………………………．１３

２．４．４脱脂罗非鱼皮胶原蛋白提取率………………………………………．１７

２．５本章小结………………………………………………………………………１７

第三章罗非鱼皮胶原蛋白的理化性质研究…………………………………………１９

３．１材料与试剂……………………………………………………………………１９

３．２仪器与设备……………………………………………………………………１９

３．３实验方法及内容………………………………………………………………１９

万方数据

３．３．１罗非鱼皮胶原蛋白的氨基酸组成……………………………………１９

３．３．２胶原蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳……………………………………．１９

３．３．３胶原蛋白的紫外光谱扫描……………………………………………２０

３．３．４胶原蛋白热变性温度（Ｔｄ）的测定……………………………………一２０

３．３．５胶原蛋白的溶解性实验………………………………………………．２０

３．４实验结果及分析………………………………………………………………２１

３．４．１罗非鱼皮胶原蛋白的氨基酸组成……………………………………．２１

３．４．２胶原蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳……………………………………．２１

３．４．３胶原蛋白的紫外光谱扫描……………………………………………．２２

３．４．４胶原蛋白热变性温度（Ｔｄ）的测定……………………………………一２３

３．４．５胶原蛋白的溶解性实验………………………………………………．２４

３．５本章小结………………………………………………………………………２５

第四章罗非鱼皮胶原蛋白多肽的制备及性质………………………………………２６

４．１材料与试剂……………………………………………………………………２６

４．２仪器与设备……………………………………………………………………２６

４－３实验方法及内容………………………………………………………………２６

４．３．１梯级多肽的制备………………………………………………………．２６

４．３．２鱼皮胶原多肽水分含量测定…………………………………………．２７

４．３．３鱼皮胶原多肽灰分含量测定…………………………………………．２７

４．３．４鱼皮胶原多肽总蛋白含量测定………………………………………．２７

４．３．５鱼皮胶原蛋白多肽纯度测定…………………………………………．２７

４．３．６鱼皮胶原多肽平均分子量分布的测定………………………………．２７

４．４实验结果及分析………………………………………………………………２８

４．４．１胶原蛋白多肽水分含量………………………………………………．２８

４．４．２胶原蛋白多肽灰分含量………………………………………………．２８

４．４．３胶原蛋白多肽总蛋白含量……………………………………………．２９

４．４．４胶原蛋白多肽的纯度…………………………………………………．２９

４．４．５多肽平均分子量分布…………………………………………………．２９

４．５本章小结………………………………………………………………………３０

第五章罗非鱼皮胶原蛋白及多肽对小鼠皮肤的护肤功效…………………………３ｌ

５．１材料与试剂……………………………………………………………………３１

５．２仪器与设备……………………………………………………………………３ｌ

５－３实验方法及内容………………………………………………………………３１

５．３．１胶原蛋白及多肽涂抹实验……………………………………………．３１

ＶＩＩ

万方数据

５．３．２鼠皮的制备……………………………………………………………．３２

５．３－３小鼠皮肤角质层含水量的测定………………………………………．３２

５．３．４小鼠皮肤白度的测定…………………………………………………．３３

５．３．５小鼠皮肤组织形态的观察和成肌纤维细胞计数……………………．３３

５．４实验结果及分析………………………………………………………………３７

５．４．１胶原蛋白及多肽对小鼠皮肤角质层水含量的影响…………………．３７

５．４．２胶原蛋白及多肽使用对小鼠皮肤白度的影响………………………．３９

５．４．３胶原蛋白及多肽对小鼠皮肤形态结构的影响………………………．４１

５．５本章小结………………………………………………………………………４４

第六章结论与展望……………………………………………………………………４５

６．１结｛仑……………………………………………………………………………………………………．４５

６．２展望……………………………………………………………………………４５

参考文献………………………………………………………………………………４７

攻读学位期间的学术活动及成果清单………………………………………………５２

ＶⅡＩ

万方数据

插图清单

图２．１温度对罗非鱼皮脱脂率的影响……………………………．．１１

图２．２ｐＨ对罗非鱼皮脱脂率的影响…………………．……．．……１２

图２．３加酶量对罗非鱼皮脱脂率的影响……………………………１２

图２．４脱脂时间对罗非鱼皮脱脂率的影响…………………………．１３

图２．５脱脂时间与脱脂温度对脱脂率的影响………………………．．１６

图２．６脱脂温度与加酶量对脱脂率的影响…………………………．１６

图２．７脱脂时间与加酶量对脱脂率的影响…………………………．１６

图３．１罗非皮胶原蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳谱图………………………．２２

图３．２罗非鱼皮胶原蛋白紫外吸收光谱……………………………２３

图３．３罗非鱼皮胶原蛋白热变性曲线……………………………．．２４

图３．４罗非鱼皮胶原蛋白溶解度曲线……………………………．．２４

图５．１涂抹液液处理后鼠皮肤角质层红外扫描图……………………．３８

图５．２小鼠皮肤组织切片………………………………………４３

ＩＸ

万方数据

表格清单

表２．１Ｂｏｘ－Ｂｅｎｈｎｋｅｎ中心组合实验因素水平编码表…………………．１０

表２．２罗非鱼鱼皮基本化学组成（以湿基计）………………………１０

表２．３响应面分析实验结果……………………………………．１４

表２．４方差分析表…………………………………………．．．１４

表３．１罗非鱼皮胶原蛋白氨基酸组成……………………………．．２１

表４．１胶原蛋白多肽水分含量…………………………………．．２８

表４．２胶原蛋白多肽灰分含量…………………………………．．２８

表４．３胶原蛋白多肽的总蛋白含量………………………………．２９

表４．４胶原蛋白多肽纯度…．．…．．……………．………．………２９

表４．５胶原蛋白多肽平均分子量分布……………………．………．３０

表５．１鼠皮组织梯级脱水流程…………………………………．．３４

表５．２鼠皮组织透明化流程……………………………………．３５

表５．３鼠皮组织浸蜡时间……………………．………．………．３５

表５．４苏木紫染流程………………………………………．．３６

表５．５伊红染流程…………．………………………………３６

表５．６鼠皮组织切片透明化流程表………………………………．３７

表５．７小鼠皮肤角质层吸光度之比………………………………．３９

表５．８小鼠涂抹不同配方溶液皮肤颜量值………………………．．４０

表５．９小鼠皮肤切片组织形态特征………………………………．４ｌ

Ｘ

万方数据

第一章绪论

第一章绪论

本章主要从胶原蛋白的结构、分布及来源、提取及制备方法三个方面介

绍胶原蛋白的基本知识，在充分了解胶原蛋白的研究以及应用现状后，确立

本篇论文立题依据及实验方法。

１．１胶原蛋白概况

１．１．１胶原蛋白的结构

胶原蛋白（也称胶原，ｃｏｌｌａｇｅｎ），是一种细胞外的不溶性蛋白质，常以

纤维形式存在于动物体组织中。原胶原是胶原蛋白的基本结构单元，是一种

由三条多肽链扭曲旋转形成的螺旋结构【ｌ】。胶原蛋白种类较多，目前已被发

现的胶原蛋白有１９种，胶原样蛋白１０种以上。胶原蛋白肽链是由氨基酸残

基之间通过形成肽键键合而成。螺旋盘绕的肽链结构中，每条肽链本身又具

有特殊的左手螺旋结构ｆ２】。胶原蛋白中富含甘氨酸和脯氨酸，甘氨酸含量达

到总氨基酸残基的３３％，脯氨酸则接近２５％１３１，因此甘氨酸和脯氨酸被当作

胶原蛋白的特征氨基酸。胶原蛋白中酪氨酸残基含量很少，并且几乎不含

氨酸和半胱氨酸。胶原分子包含的三条肽链，具有约１０００个氨基酸残基，

每条肽链相对分子质量在１００千道尔顿左右，所以胶原分子的相对分子质量

约３００干道尔顿【４Ｊ。

１．１．２胶原蛋白的分布及来源

胶原蛋白在生物体中含量多、分布广，从水母、海绵等简单多细胞生物

到线虫、蚯蚓等低等脊椎动物，再到高等的哺动物机体组织中，都含有一

定量的胶原蛋白［５１。胶原是细胞外基质主要组分之一，是哺动物体内含量

最多的一类蛋白质。胶原蛋白主要分布在生物体的骨骼，牙齿，皮肤，韧带

和结缔组织、内脏间质等部位中，并使相应组织具有特定的机械强度以支撑

器官、保护机体［１１。陆生哺动物猪、牛、羊等的皮肤、骨骼中含有大量的

胶原蛋白，是目前工业生产胶原蛋白的主要来源。但近年来由于陆生动物源

传染病、宗教忌讳以及猪、牛、羊类产品生产环节产生的碳排放比鸡、鱼产

品高出５０％，出于减少碳排放等环境保护要求【６】，以及水产生物加工副产品

中如鱼皮、鱼鳞、鱼眼、鱼鳍、乌贼类的皮和头盖软骨、章鱼皮、鲍的肌肉

和外套膜等中胶原蛋白含量相对丰富，因此成为胶原蛋白新的提取来源ＨＪ。

胶原蛋白最常见的分类方式是根据是否具有周期性横纹胶原原纤维，将

胶原蛋白分为原纤胶原蛋白和非原纤胶原蛋白【８］。原纤胶原蛋白包括Ｉ、ＩＩ、

万方数据