学报

JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2010，41（6）：555－557555

金银花中木犀草苷含量测定方法的耐用性考察

张强

，

冯文军

，

李晓冬

（

哈药集团中药二厂质量检验中心

，

哈尔滨

150078）

摘要按照中国药典方法

，

利用反相高效液相谱法

，

对分离条件的耐用性进行了研究

。

在不同的谱条件下

，

研

*

PackODS-A

谱柱

，0.5%

冰醋酸溶究了金银花中木犀草苷含量测定的谱分离情况

，

结果当采用

YMC-

乙腈为流动相

A，

液为流动相

B

进行梯度洗脱

，

检测波长为

350nm，

流速为

1mL/min，

柱温为

40℃

时

，

分离效果较好

，

精密度和重复性良好

，

能达到中国药典相关要求

。

关键词木犀草苷

；

含量测定

；

谱分离条件

；

耐用性实验

R917

文献标识码

A

文章编号

1000－5048（2010）06－0555－03

中图分类号

Robustnesstestondeterminationofluteolin-7-O-glucosideinFlosLonicerae

ZHANGQiang*，FENGWen-jun，LIXiao-dong

HarbinPharmGroupCo.，Ltd．，SecondChineseMedicineFactory，Harbin150078，China

AbstractInaccordancewiththeChinesePharmacopoeia，chromatographicseparationconditiwerestudiedto

determineluteolin-7-O-glucosis

showedthatwhenaYMC-PackODS-Acolumnwasadoptedwiththegradientelutionusingthemobilephaseoface-

tonitrileasmobilephaseA，0.5%aceticacidsolutionasmobilephaseB，thedetectionwavelengthwas350nm，the

flowratewas1mL/min，andthecolumntemperaturewas40°C，thebetterseparation，precisionandrepeatability

dmeettherelevantrequirementsoftheChinesePharmacopoeia;andthechromatographicsep-

arationconditicouldbeusedastheconditiforthedeterminationofluteolin-7-O-glucosideinFlosLonicerae.

Keywordsluteolin-7-O-glucoside;determination;chromatographicseparationconditi;robustnesstest

PackODS-A（150mm×4.6mm，

谱柱

：（1）YMC-

5

μ

m）；（2）YMC-PackODS-A（150mm×4.6mm，

5

μ

m）；（3）AgilentTC-C

18

（150mm×4.6mm，

5

μ

m）；（4）PhenomenexC

18

（150mm×4.6mm，

5

μ

m）；（5）Kromasil100-5C

18

（250mm×4.6mm）；

（6）WatersC

18

（250mm×4.6mm，5

μ

m）。

木犀草苷对照品

（

供含量测定用

，

中国药品生

物制品检定所

）；

金银花原药材

（

山东三精制药有

限公司

）；

乙腈

（

谱纯

，

北京迪马科技有限公司

）；

冰醋酸

（

谱纯

，

天津市光复精细化工研究所

）；

水

为二次蒸馏水

。

2

2.1

2.1.1

方法与结果

方法［1］

金银花是我国传统中药材

，

有较强的杀菌消

炎

、

解热镇痛的功效

。

金银花属于忍冬科

，

按照

《

中华人民共和国药典

》（2005

版

）

规定

，

金银花中

的代表性成分是绿原酸和木犀草苷

，

是否含有木犀

忍冬藤的草苷是区别正品金银花和同科的山银花

、

主要化学指标

，

也是正品金银花与山银花等同科植

物在疗效上有差异的主要原因

。

但是按照药典方

往往分离效果不好

，

严法检测木犀草苷的含量时

，

为快速

、

准确地测重影响了其含量测定的准确性

，

定金银花中木犀草苷的含量

，

确保药物的疗效

，

本

课题对金银花中木犀草苷的反相高效液相谱分

离条件的耐用性进行了研究

。

1材料

20AT

高效液相谱仪及附件

。

日本岛津

LC-

谱条件谱柱

：

以十八烷基硅烷键合

*06-12

收稿日期

2010-*通讯作者

Tel：E-mail：zhangqiangmarry@

556学报

JournalofChinaPharmaceuticalUniversity

第

41

卷

硅胶为填充剂

；

流动相

：

以乙腈为流动相

A，

以

0.5%

冰醋酸溶液为流动相

B，0～

进行梯度洗脱

，

30min，

流动相

A

由

10%

→

30%；

检测波长

：

350nm；

进样量

：10

μ

L；

理论板数按木犀草苷峰计

算不低于

2000。

2.1.2

对照品溶液的制备

即得

。

溶液

，

2.1.3

供试品溶液的制备

精密称取木犀草苷

对照品适量

，

以

70%

乙醇制成每

1mL

含

40

μ

g

的

取金银花细粉

（

过四

号筛

）

约

3g，

精密称定

，

置具塞锥形瓶中

，

精密加入

70%

乙醇

50mL，

称定重量

，

超声处理

（

功率

250W，

频率

35kHz）1h，

放冷

，

再称定重量

，

用

70%

乙醇补

足减失的重量

，

摇匀

，

滤过

，

取续滤液

，

即得

。

2.2

2.2.1

谱分离条件的优化

不同流速的比较使用谱柱

（1）

按照中

1.0，

国药典方法

，

柱温

30℃，

比较了不同流速

（0.8，

1.2mL/min）

木犀草苷的分离情况

。

结果上述各流

速木犀草苷的分离情况都较差

，

谱图见图

1。

Figure1Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosideatdifferentflowrate

A：0.8mL/min；B：1.0mL/min；C：1.2mL/min

2.2.2

流动相不同梯度变化的比较使用谱柱

（1）

按照中国药典方法

，

柱温

30℃，

流速

1mL/min，

比较了流动相不同梯度变化木犀草苷的分离情况

：

A

由

10%

→

30%；

第第

1

种梯度变化

0～30min，

2

种梯度变化

0～40min，A

由

10%

→

30%；

第

3

种

A

由

10%

→

30%，梯度变化

0～50min，

结果上述

各流动相梯度木犀草苷的分离情况都较差

，

谱图

见图

2。

Figure2Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosidewithdifferentmobilephasegradient

A：Gradient1；B：Gradient2；C：Gradient3

2.2.3

不同柱温的比较使用谱柱

（1）

按照中国

流速

1mL/min，

比较了不同柱温条件典方法

，

30，35℃

木犀草苷的木犀草苷的分离情况

，

结果

25，

分离情况都较差

，

且柱温

25℃

时木犀草苷主峰和相

邻杂质峰合为一个峰

，

只有柱温

40℃

能得到较好的

分离

，

且能达到药典相关要求

，

谱图见图

3。

2.2.4

不同厂家谱柱的比较按照中国药典方

比较了不同厂家谱柱木犀草苷的分离情况

，

柱法

，

（2）、（3）、（4）

流速

1mL/min，

温

40℃，

谱柱

（1）、

（6）

流速

0.8mL/min，（5）、

结果谱柱

（1）

和谱

柱

（2）

均能得到较好的分离

，

且都能达到中国药典

（4）、（5）、（6）

分离效果都相关要求

。

谱柱

（3）、

（6）

木犀草苷主峰和相邻杂较差

，

而且谱柱

（5）、

质峰合为一个峰

，

谱图见图

4。

2.3

精密度和重复性

PackODS-A（150mm×4.6mm）

采用

YMC-

第

6

期张强等

：

金银花中木犀草苷含量测定方法的耐用性考察

557

Figure3Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosidewithdifferentcolumntemperature

A：25℃；B：30℃；C：35℃；D：40℃

Figure4Chromatogramsofluteolin-7-O-glucosidewithdifferenttypeofcolumn

A：Column（1）；B：Column（2）；C：Column（3）；D：Column（4）；E：Column（5）；F：Column（6）

谱柱

，

流速

1mL/min，

柱温

40℃

作为谱条件按

照中国药典方法进行精密度和重复性试验

。

2.3.1

取同一供试品溶液

，

在上述谱

条件下重复进样

6

次

，

测定峰面积值

，

计算仪器精

精密度

6

次进样的

RSD

为

0.05%，

密度

，

表明本方法的精

密度良好

。

2.3.2

重复性取同一批号样品

，

制备

6

份供试

品溶液

，

在上述谱条件下

，

分别精密吸取

10

μ

L，

3讨论

PackODS-A

按照中国药典方法

，

采用

YMC-

谱柱

，

流速

1mL/min，

柱温

40℃

作为金银花中木

犀草苷含量测定的谱条件

，

分离效果较好

，

精密

度和重复性良好

，

能达到中国药典相关要求

，

可作

为中国药典金银花中木犀草苷含量测定的谱

条件

。

本实验发现在很多谱条件下木犀草苷和相

邻杂质峰分离不好

，

而且在有些谱条件下木犀草

苷和相邻杂质峰合为一个峰

，

极易导致木犀草苷含

量测定结果偏大

。

不同厂家的谱柱对物质的分离效果不一样

，

在实验和工作中要选择合适的谱柱

，

另外柱温对

物质的分离效果的影响也不容忽视

。

参考文献

［1］

国家药典委员会

.

中华人民共和国药典

：

一部

［M］.

北京

：

化

2005：153.

学工业出版社

，

注入液相谱仪

，

测定峰面积值

，

计算方法精密度

，

6

份供试品检测结果的

RSD

为

0.4%，

表明本方法

的重复性良好

。

2.4

不同批次金银花木犀草苷含量测定结果

取

5

批不同批号金银花样品

，

分别制备供试品

溶液

，

在

“2.3”

所述谱条件下

，

分别精密吸取

10

μ

L，

注入液相谱仪

，

测定木犀草苷的含量

，

结

果见表

1。

Table1Determinationofluteolin-7-O-glucosideinFlosLonicerae（n=2）

No.

080302

080701

090601

090902

090903

Averagecontent/%

0.068

0.085

0.063

0.098

0.052

RSD/%

0.1

0.1

0.3

0.2

0.0